如何为Western Blotting选择最佳的滤膜?



蛋白质印迹是一个术语,是指用于样品中蛋白质检测的分析技术。生物样品从凝胶转移到膜上,以便在其表面紧密检测。这是蛋白质分析的常规过程,可提供有关给定样品的半定量和定量数据。为确保此过程的准确性,请选择**佳类型的膜以传递所需的信号。它**同时抵抗非特异性和背景结合。该选择很大程度上取决于蛋白质样品的特性和该过程中预期的下游检测。

在Western印迹中选择PVDF膜的因素:

蛋白质印迹优选使用两种主要类型的膜。它们是硝酸纤维素膜和PVDF或聚偏二氟乙烯膜。在这两个之中选择**佳选择需要考虑以下特定因素:

评估蛋白质结合能力:

如果您需要更高的结果灵敏度,则**好使用PVDF滤膜,因为它们具有很高的蛋白质结合能力。这些过滤器的容量为170-200μg/ cm2。这种能力使PVDF注射器过滤器可以检测低表达的蛋白质。在借助PVDF膜进行抗体检测的步骤中,您还将获得很高的背景噪音。另一方面,硝化纤维过滤器中的背景噪声可能会略低,但它们不允许PVDF的检测灵敏度。

评估身体特征:

已知PVDF过滤器比大多数其他过滤器类型更耐用,更坚固。它们为测序目的提供了更好的耐化学性。您可以剥离并探测这些膜而不会造成信号损失。当暴露于刺激性化学物质时,PVDF过滤器可以维持处理并保持弹性。因此,在进行**终选择之前,请在产品资料中检查其物理特性。

询问孔尺寸:

通常,这两种硝化纤维素和PVDF注射器过滤接 ř可以以各种孔径大小被发现。您**根据样品的物理特性选择合适的尺寸。尺寸范围可以从0.1um至0.45um。对于大多数蛋白质印迹应用,理想的孔径是0.45。但是,对于低分子量的样品,优选使用0.1或0.2 um的孔径。

评估绑定属性和膜格式:

蛋白质分子将通过偶极和疏水相互作用与PVDF膜结合。因此,进行选择时请仔细检查此功能。在这里,您还**考虑在该过程中使用的膜格式。它取决于灵活性,价格,便利性和要使用的传输系统。选择预先润湿的过滤器,以在应用中获得更大的通量,便利性和灵活性。预切膜是减少工艺时间并确保更高重现性的可行选择。

因此,当检测高分子量蛋白质时,PVDF过滤器是从应用中获得理想结果的**佳选择。