微孔滤膜过滤除菌

一、实验意图要求 (1)了解过滤除菌的原理。 (2)把握微孔滤膜过滤除菌的办法。 二、基本原理 
虽然有报道称原核细菌小**纳米(10-9m)级,大可达0.1~0.3mm乃**
0.75mm(非洲纳米比亚球菌),一些真核微生物如蘑菇、木耳等担子菌也非常大。但jue大部分微生物都是微米级(10-6mm),常用的微孔滤膜可以把jue大部分细菌别离开来。过滤除菌是依据微生物的巨细,如原核微生物的尺度为1~10μm(球菌0.5~2μm,杆菌长1~8μm、宽0.5~1μm,螺旋菌长5~50μm、宽0.5~5μm),真核微生物的尺度为10~100μm(粗略地说,真核微生物和原核微生物巨细存在10:1的递减规则),挑选孔径不同的滤膜,经过机械效果滤去液体或气体中微生物的办法(图1—2)。 

这是一种非杀灭性除菌方法,实际上到达菌液别离的作用。详细试验应根据不同的需求选用不同的滤器和滤板资料。市面上常见的微孔滤膜有醋酸纤维酯和硝酸纤维酯滤膜等,孔径有0.025μm、0.05μm、0.10μm、0.20μm、0.22μm、0.30μm、0.45μm、0.60μm、0.65μm、0.80μm、1.00μm、2.00μm、3.00μm、5.00μm、7.00μm、8.00μm和10.00μm等,试验室除菌用一般挑选0.22μm,但除病毒需挑选更小孔径的滤膜。大滤板有石棉滤板、K型滤板(孔径**大,作一般弄清用)、EK滤板(滤孔较小,用以去除一般细菌)、EK-S滤板(滤孔**小,可阻挠大病毒经过)。 
此法除菌的**大长处是能够不损坏溶液中各种物质的化学成分,适用于酶、朊、核酸、抗生素、病毒等活性分子的过滤,但由于滤量有限,所以一般只适用于试验室中小量溶液的过滤除菌。跟着反渗透技能的逐步老练和成本下降,大规模的过滤除菌工业使用也现已呈现:在矿泉水、纯净水出产制造过程中已有使用。 
三、试验资料与设备 1.培养基 
2%的葡萄糖溶液(葡萄糖试剂需满意HG/T 3475 —1999《化学试剂葡萄糖》要求)、肉汤朊胨琼脂培养基(平皿)、养分肉汤。 
肉汤朊胨琼脂培养基制造:朊胨10g,牛肉膏5g,NaCl 5g,蒸馏水1000mL,琼脂16g,调理pH**7.2,分装克氏瓶,每瓶150mL,121℃、20min灭菌,后平放成平板。养分肉汤类有YY/T1187—2010《养分肉汤培养基》可作参考,制造:朊胨10.0g,牛肉粉3.0g,NaCl 5.0g(质量应满意GB/T 1266—2006《化学试剂氯化钠》),pH值7.2±0.2(25℃),加热溶解于1000mL蒸馏水中,分装三角瓶或试管,121℃高压灭菌15Dmin备用。 
如无特别阐明,本书及附录中所有药品均为市售剖析纯(AR)或生物化学纯(BR)或以上纯度等级试剂,蒸馏水为双蒸水或去离子水,所有市售化学药品应满意有关G家法律法规、规范和/或技能规范等。我G现已拟定施行的化学试剂规范有280多条,如GB/T1266—2006《化学试剂氯化钠》等,为了便利阅览,在本书相应初次提及的当地,都作了提示。 
2.仪器或其他用具 
注射器、微孔滤膜过滤器、0.22μm/0.45μm滤膜、无菌试管、镊子、玻璃刮棒、真空泵或水泵、砂芯过滤设备。有关设备**少应满意GB/T u415 89《实验室烧结(多孔)过滤器孔径、分级和商标》等的要求。 
四、操作过程 1.很多液体过滤除菌 
将0.22μm孔径的滤膜装入清洗洁净的砂芯过滤设备中,旋紧或稍真空抽滤,压平(如用一次性预灭菌的带膜针式滤头则无此过程),包装灭菌(0.1MPa、121.5℃灭菌20min)后待用。 
2.针孔过滤器 
将灭菌滤器的进口在无菌条件下以无菌操作方法衔接于装有待滤溶液(2%葡萄糖溶液)的注射器上,将针头与出口处衔接并刺进带橡皮塞的无菌容器中(图1一3)。 3.压滤 
将注射器中的待滤溶液加压缓缓挤入过滤到无菌试管中,滤毕将针头拔出。 注意:压滤时,用力要适中,不可太猛、太快,以免细菌被挤压通过滤膜。 4.无菌检查以无菌操作吸取除菌滤液0.1mL或许直接将滤膜培育于朊胨琼脂平板上,涂布均匀,置37℃温室中培育24h,查看是否有菌成长。 
5.清洗 
弃去砂芯过滤设备上的微孔滤膜,将砂芯过滤设备清洗洁净,并换上一张新的微孔滤膜组装包扎,再经灭菌后使用。 
注意:整个进程应在无茵条件下严厉无茵操作,以防污染。过滤时应防止各连接处呈现渗透现象。 
归纳比较上述**部分到第五部分介绍的消毒、杀菌和除菌办法,可见各有各的特色、用途和规模,具体和特定条件下选用哪种办法,应归纳起来考虑。除经济考虑外,针对原料和环境要素,比较各类办法(表1—3),以供参阅。